CRISPR/Cas9敲除细胞系构建
根据给定GeneID或DNA序列,设计3个敲除位点构建敲除载体,通过测序验证载体是否构建成功。在构建成功的基础上,提取去内毒素质粒并转染细胞,进行敲除效率验证。
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Cas9慢病毒包装
构建慢病毒Cas9表达体系可以有效的将Cas9转入细胞,并高效表达。为第二步转入识别靶点的gRNA筛选阳性细胞的抗性基因或荧光基因,用于同源重组模板,降低了难度。
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