Edman降解主要用于确定多肽和蛋白质的氨基酸序列。Edman降解的4个步骤主要包括：初步反应、环化反应、分解反应和重复反应。首先，在初步反应中，蛋白质的N-末端氨基酸与异硫氰酸苯酯（PITC）反应，形成苯基异硫氰酸酯衍生物。接着，进入第二步，环化反应，这一阶段在酸性条件下，形成一个环状的衍生物——thiazolinone。随后，在第三步分解反应中，环状产物进一步转化为更稳定的苯硫酮。第四步是重复反应，分离出来的氨基酸可用质谱或色谱技术鉴定，而后循环进行下一氨基酸的降解。

（1）原理：在碱性条件下，蛋白质或肽链的 N - 末端氨基酸残基与异硫氰酸苯酯（PITC）发生反应，形成苯氨基硫甲酰（PTC）衍生物。这一反应是亲核加成反应，N - 末端氨基作为亲核试剂进攻 PITC 的碳 - 硫双键。 （1）原理：在无水的酸性条件下，上一步生成的 PTC - 氨基酸衍生物发生环化反应，形成一个不稳定的苯乙内酰硫脲（PTH） - 氨基酸和一个缩短了一个氨基酸残基的肽链。环化反应是通过分子内的亲核取代反应进行的，PTC - 氨基酸中的硫原子作为亲核试剂攻击相邻的羰基碳原子，形成一个五元环结构，然后肽键断裂，释放出 PTH - 氨基酸。 （1）原理：反应生成的 PTH - 氨基酸需要从反应混合物中分离出来，以便进行后续的鉴定。由于 PTH - 氨基酸在有机溶剂（如乙酸乙酯）中有较好的溶解性，而肽链和其他反应试剂在适当的缓冲液中溶解性不同，所以可以利用这种溶解性的差异进行萃取分离。 （1）原理：对分离得到的 PTH - 氨基酸进行鉴定，以确定其种类。最常用的鉴定方法是高效液相色谱法（HPLC），不同的 PTH - 氨基酸在色谱柱中的保留时间不同，通过与标准的 PTH - 氨基酸保留时间进行对比，可以确定其种类。1、初步反应——偶联反应（Coupling Reaction）

（2）反应条件：通常在 pH 8 - 9 的碱性缓冲液（如碳酸氢钠或硼酸钠缓冲液）环境中进行。该 pH 范围有利于氨基保持未质子化状态，从而使其具有足够的亲核性来参与反应。反应温度一般控制在 40 - 50℃，适当的温度可以加快反应速度，但又不会因为温度过高导致副反应过多。

（3）示例：以一个简单的三肽（A - B - C）为例，其 N - 末端氨基酸 A 会与 PITC 反应，生成 A - PTC - B - C。

2、环化反应——环化裂解反应（Cyclization - Cleavage Reaction）

（2）反应条件：一般使用三氟乙酸（TFA）作为酸性试剂，并且反应需要在无水环境下进行，以防止副反应。反应温度通常在室温或稍微高于室温的条件下，因为 TFA 的酸性较强，在较低温度下就能有效地促进环化裂解反应。

（3）示例：对于上述的 A - PTC - B - C，经过此反应后，会生成 PTH - A 和 B - C。PTH - A 可以通过后续的分析方法进行鉴定，从而确定肽链 N - 末端的第一个氨基酸是 A；而 B - C 则是剩余的肽链，可用于下一轮的 Edman 降解反应，以确定第二个氨基酸。

3、分解反应——萃取分离（Extraction and Separation）

（2）操作过程：将反应后的混合物与乙酸乙酯混合，充分振荡后，PTH - 氨基酸会转移到乙酸乙酯相中。然后通过离心或分层等方法，将含有 PTH - 氨基酸的乙酸乙酯层与含有肽链和其他反应试剂的水相分离。

（3）示例：在上述反应得到的混合物中，加入乙酸乙酯后，PTH - A 会被萃取到乙酸乙酯相中，而 B - C 肽链则留在水相，这样就实现了 PTH - 氨基酸和剩余肽链的分离。

4、重复反应——鉴定（Identification）

（2）操作过程：将含有 PTH - 氨基酸的乙酸乙酯提取物进行适当的浓缩后，注入 HPLC 仪器中。设置合适的色谱条件，如流动相的组成（通常是含有一定比例有机溶剂的缓冲液）、流速和柱温等。通过检测色谱峰的出现时间和峰形，与已知标准 PTH - 氨基酸的色谱图进行匹配，从而确定从肽链 N - 末端降解下来的氨基酸种类。

（3）示例：如果在 HPLC 图谱中，分离得到的 PTH - 氨基酸的保留时间与标准 PTH - 丙氨酸的保留时间一致，那么就可以确定原肽链的 N - 末端第一个氨基酸是丙氨酸。

常见问题

1、N-末端阻断问题

如果N-末端被化学修饰或阻断，Edman降解将无法进行。此时需要进行脱保护基处理。

2、多肽链长度限制

由于累积误差的存在，Edman降解一般用于分析不超过50个氨基酸的多肽。

技术优势

1、高特异性

Edman降解对于N-末端氨基酸的检测具有高度特异性。

2、序列精确性

在较短的多肽片段中可以获得极为精确的氨基酸序列信息。

3、成熟稳定

Edman降解技术已相当成熟，具有可重复性和稳定性。

Edman降解能够解析蛋白质的一级结构，从而揭示与蛋白质功能相关的结构信息。通过分析蛋白质的序列，科研人员可以预测基因突变的影响、识别潜在的药物靶点，并针对特定序列设计新的治疗分子。百泰派克生物科技提供专业的Edman降解分析服务。我们的团队配备有经验丰富的技术人员，严格把控每一个步骤，确保高质量的蛋白质序列分析结果。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

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