HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit 
(gDNA digester plus)
产品信息
产品名称
产品编号
规格
储存
价格（元）
HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)
11139ES50
50 T
-20℃
746.00 
HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)
11139ES70
200 T
-20℃
2196.00
产品描述
HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)是含有基因组DNA去除步骤的cDNA第一链合成试剂盒。该试剂盒基于HifairTM Ⅲ Reverse Transcriptase而开发。与HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase相比，HifairTM Ⅲ Reverse Transcriptase热稳定性大幅度提高，可耐受高达55℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，非常适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。HifairTM Ⅲ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升，可扩增长达12 kb的cDNA。
该试剂盒包含gDNA digester，可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染，保证后续结果更加可靠。该试剂盒提供两种cDNA合成引物：Random Primers和oligo (dT)18，用户可根据需要，选择Random Primers，Oligo (dT)18或Gene Specific Primers作为逆转录引物，合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。
产品组分
编号
组分
产品编号/规格
11139ES50 (50 T)
11139ES70 (200 T)
11139-A
RNase free ddH2O
1 mL
2×1.2 mL
11139-B
5×gDNA digester Buffer
100 μL
400 μL
11121-C
gDNA digester
50 μL
200 μL
11139-D
5×HifairTM Ⅲ Buffer plus
200 μL
2×400 μL
11139-E
HifairTM Ⅲ Enzyme Mix
100 μL
2×200 μL
11139-F
Oligo (dT)18 (50 μM) 
50 μL
200 μL
11139-G
Random Primers (50 ng/μL)
50 μL
200 μL
【注】：1) 5×HifairTM Ⅲ Buffer plus包含dNTP和gDNA digester抑制剂；
2) HifairTM Ⅲ Enzyme Mix包含RNase inhibitor。
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存。
注意事项
1）反应液的配制应在冰上操作完成，操作过程应避免RNase污染；
2）如果加入RNA模板体积较大 (如超过2 μL)，请确保RNA是溶于水中而不是TE中，因为TE会对gDNA去除以及逆转录反应产生抑制；
3）可以不经过基因组去除步骤，直接进行逆转录，这样所得到的结果会与使用HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit （Cat No. 11135ES）效果一致。但是请勿将gDNA digester与11135ES中的5×HifairTM Ⅲ Buffer配套使用，因其不含终止gDNA digester反应的成分，会影响反转录和后续的qPCR实验。

引物选择
1. 若后续为PCR实验
1） 如果模板为真核生物来源，建议选择Oligo (dT)18 ，与真核生物mRNA的3’ Poly A尾配对，可获得最高产量的全长cDNA。 
2）基因特异性引物(GSP)的特异性最高。但有些情况下，用于PCR反应的GSP无法有效引导第一链cDNA合成时，可改用Oligo (dT)18或Random Primers重新进行逆转录。 
3）Random Primers特异性较低，所有RNA，包括mRNA、rRNA、tRNA均可作为Random Primers的模板。当目标区域具有复杂二级结构或GC含量较高，或者模板为原核生物来源，且使用Oligo (dT)18或基因特异性引物(GSP)无法有效引导cDNA合成时，可使用Random Primers作为引物。
2. 若后续为qPCR实验
建议将Oligo (dT)18和Random Primers混合使用，可使mRNA的各个区域均能以相同效率引发cDNA合成，有助于提高定量结果的重复性。
第一链cDNA合成操作步骤
一、若后续为PCR实验
1. 残留基因组DNA去除
在RNase free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。
组分
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