甘薯潜隐病毒 (SPLV)酶联免疫分析试剂盒说明书-分析方法-资讯-生物在线

甘薯潜隐病毒 (SPLV)酶联免疫分析试剂盒说明书

作者:北京冬歌博业生物科技有限公司 2015-03-27T00:00 (访问量:2239)

 本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于检测组织,细胞及相关样本中甘薯潜隐病毒 (SPLV)平。

实验原理

  本试剂盒用双抗夹心酶联免疫ELISA测定标本甘薯潜隐病毒 (SPLV)。用纯化的甘薯潜隐病毒 (SPLV)抗体包被微孔板,制成固相抗可与样品中甘薯潜隐病毒 (SPLV)相结合经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的甘薯潜隐病毒 (SPLV)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中甘薯潜隐病毒 (SPLV)的存在与否。

 

试剂盒组成

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶标包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

阴性对照

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

阳性对照

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

酶标试剂

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

样品稀释液

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

显色剂A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

显色剂B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

终止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

浓缩洗涤液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃保存

 

样本处理及要求

1. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBSPH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

2. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但避免反复冻融.

3. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

 

操作步骤

1. 编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)

2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,

3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   

4. 配液:将3048T20倍)倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml后备用

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 

7. 温育:操作同3

8. 洗涤:操作同5

9. 显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟

10. 终止:每孔加终止50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)

11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD

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