AMRESCO琼脂糖使用指导-分析方法-资讯-生物在线

AMRESCO琼脂糖使用指导

作者:北京索莱宝科技有限公司--实验室产品 2016-04-08T00:00 (访问量:4124)

 AMRESCO琼脂糖使用指导

产品: 琼脂糖

货号: 0710 0815 E776

    E434     J234      X174

正确的加热方式对琼脂糖的充分溶解和凝结至关重要,在此,我们提供以下几点作为正确制备琼脂糖凝胶的操作参考。

AMRESCO琼脂糖加热溶解所需时间短。

琼脂糖在TAE或者TBE缓冲液中不溶解,加热时,琼脂糖颗粒水化形成溶液,水化是时间依赖的,不同的琼脂糖水化点不同。AMRESCO琼脂糖纯度高,超微颗粒,非常适合作为电泳实验载体。对比于其他的琼脂糖,AMRESCO琼脂糖水化速度快,使用者无需煮沸过长时间,否则易导致胶液浓稠,不利于混匀,凝胶后易破损。

AMRESCO琼脂糖凝胶制备

1×TBE溶液配制1%浓度琼脂糖凝胶

1. 用于制备胶液的锥形瓶体积应为胶液体积的2-4倍,缓慢向缓冲液中加入琼脂糖,边加边搅拌,防止琼脂糖聚集。记录瓶体和溶液总重量。

2. 微波炉高火加热30s,根据配制的溶液体积调整加热时间。加热时间与微波炉、瓶体大小和琼脂糖浓度有关。

3. 摇匀琼脂糖溶液。

4. 再次高火加热30s,摇匀琼脂糖溶液。

5. 将溶液再次放回微波炉,高火加热至沸腾(大约10-35s)。接触移动时琼脂糖胶液可能会剧烈沸腾,小心操作,避免烫伤。从微波炉拿出后,室温冷却1-2min,轻轻摇晃使液体里的气泡溢出。

6. 重新放回微波炉,高火加热,使之沸腾约15s,观察琼脂糖的溶解状态,如果仍有颗粒存在,重复该步骤直至所有晶体全部溶解。

7. 待琼脂糖完全溶解成液体,重新称量总重量,计算蒸发液体量,用水补齐至原始重量,摇匀液体。

8. 建议胶液冷却至50-55℃时灌胶,有利于凝胶孔径均匀一致,不至于损伤制胶仪。灌胶前轻轻摇晃琼脂糖溶液,释放胶液中残存的气泡。

9. 向制胶槽中灌胶,一般胶的厚度3-5mm,灌胶后尽量排除梳孔之间或底部的气泡。

10. 在室温放置(30-45min)使胶充分凝结。

如果要制备不同浓度和不同体积的凝胶,请注意以下两点:

1. 在凝胶溶液煮沸前至少进行2次摇匀。

2. 胶液沸腾后,每隔10-15s观察一次胶液溶解程度(间隔时间取决于胶液浓度和体积)。

 

 

 

Guidelines for small fragment resolution using AMRESCO Agaroses

片段大小

Agarose

0815

Agarose 3:1 ™

E776

Agarose SFR

J234

备注

0.5kb

分析

2%

不建议

4-5%

TBE Buffer

3.5-5%

TAE or TBE Buffer

Agarose SFR适合,Agarose 3:1透明度较差

0.5kb

分析

3-5%

3-4%

TBE Buffer

3%

TBE Buffer

3-4%

TAE or TBE Buffer

Agarose SFRAgarose 3:1在指定浓度下机械强度较Agarose Ⅱ高,不易碎。

0.5kb

制备

 

2-4%

TAE or TBE Buffer

不建议

2-5%

TAE or TBE Buffer

浓度根据分辨率来选择。低浓度能提高片段回收纯度,TBE缓冲液不适合一些商品化的回收试剂盒。

0.5-2.0kb

分析

1.5-2.5%

TBE Buffer

1.5-2.5%

TBE Buffer

1.5-2.5%

TBE Buffer

Agarose 3:1适合

Agarose SFR电泳时间长,易导致片段弥散

 

0.5-2.0kb

制备

1.5-2.5%

TAE or TBE Buffer

不建议

1.5-2.5%

TAE or TBE Buffer

Agarose Ⅱ适合,1kb以上更佳。TBE缓冲液不适合一些商品化的回收试剂盒。

 

1.0-3.0kb

分析

1-1.5%

 

1-1.5%

 

1%

 

Agarose 3:1适合Agarose Ⅱ凝胶强度不适合印记实验。

Agarose SFR电泳时间长,易导致小片段弥散

 

以上数据仅供参考,具体选择依据实际试验要求。

参考电压5V/cm,低熔点琼脂糖电泳超过1小时者,选择较低电压3-4V/cm或者在4℃条件下电泳。

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